人惡性黑色素瘤細(xì)胞+EGFP；A375+EGFP

本公司所有產(chǎn)品僅供科學(xué)實驗，不做其他科學(xué)實驗外的使用！

商品詳情：

細(xì)胞別稱；A375-eGFP；人惡性黑色素瘤細(xì)胞-eGFP；人惡性黑色素瘤細(xì)胞-綠色熒光蛋白標(biāo)記

種屬來源；人

組織來源；黑色素瘤

生長特性；貼壁生長

細(xì)胞形態(tài)；上皮細(xì)胞樣

背景介紹；A375-eGFP是在 A375細(xì)胞上用慢病毒標(biāo)記上eGFP，可以顯示綠色熒光，帶有嘌呤霉素抗性。A375源自一位54歲女性，是Giard DJ等人建立的一系列細(xì)胞株中的一株。該細(xì)胞可在免疫抑制小鼠上成瘤，在瓊脂上形成克隆。

puro藥篩濃度；A375-eGFP細(xì)胞puro藥篩濃度為1.0ug/ml，培養(yǎng)過程中建議使用0.5

細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第三天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 -3min（視細(xì)胞消化情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細(xì)胞計數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

細(xì)胞培養(yǎng)注意事項 ：

一、 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

二、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

三、用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

四、貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

五、 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

六、 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

七、該細(xì)胞僅供科研使用。

八、備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

九、 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

催乳素(PRL)重組蛋白 Recombinant Prolactin (PRL)

IL2 Protein Human 重組人 Interleukin-2 / IL-2 蛋白

WIF1重組小鼠 WIF1 / WIF-1 蛋白 Protein

NT5E Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD73 / NT5E 蛋白

BTK重組人 Bruton Tyrosine Kinase / BTK Kinase 蛋白 Protein

BID重組小鼠 BID 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

ACTH (Adrenorticotrophin hormons 0.5mgACTH (Adrenorticotrophin hormons)(18-39) 促腎上腺皮質(zhì)激素(18-39)(抗原)

CABP5重組人 CABP3 / CABP5 蛋白 Protein

IL2 Protein Human 重組人 Interleukin-2 / IL-2 蛋白

IL2RG Protein Rat 重組大鼠 IL2RG / CD132 蛋白

豚鼠基質(zhì)金屬蛋白酶8(MMP8)檢測試劑盒 ，英文名： MMP8 ELISA Kit

Human calcineurin (CaN) ELISA Kit 人鈣調(diào)0酸酶(CaN)檢測試劑盒

rabbitEndothelin1,ET-1ELISAKit 兔子內(nèi)皮素1(ET-1)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBACE2(Humanbeta-siteAPP-cleavingenzyme2)ELISAKit人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶2

線蟲二環(huán)氧丁烷(diepoxybane)誘導(dǎo)突變試劑盒10次

Rabbitcardiacisoformofopni,cELISAKit兔心肌特異性肌鈣蛋白T(c)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人惡性黑色素瘤細(xì)胞+EGFP；A375+EGFP人組織蛋白酶D(cath-D)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人組織蛋白酶B(cath-B)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人組蛋白H2b(histon-H2b)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人組胺(HIS)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)ELISA 試劑盒

Human vitamin D receptor (VD R) ELISA Kit 人受體(VD R)檢測試劑盒

Humanai-zonapellucidaaibody,aZPELISAKit 人抗透明帶抗體(aZP)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humancholesterol,CH檢測試劑盒人(CH)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

紫外線處理DNA損傷彗星熒光檢測試劑盒20次

HumansecretedphospholipaseA2,sPLA2ELISAKit人分泌型0脂酶A2(sPLA2)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T